Rekombinante Expression und proteinchemische Charakterisierung einer potentiellen viralen (Mimivirus Acanthamoeba polyphaga) Lipoxygenase

Tatjana Gehring

doi:10.58662/9783965430716

Keywords

Search publication

Bibliographic data

Edition: 1/2019
ISBN-Print: 978-3-96543-053-2
ISBN-Online: 978-3-96543-071-6
Publisher: Lehmanns Media, Berlin
Language: German
Pages: 148
Product Type: Monograph

1. Vorwort No access
2. Inhaltsverzeichnis No access
3. Abbildungsverzeichnis No access
4. Tabellenverzeichnis No access
5. Zusammenfassung No access
6. Abstract No access
7. Abkürzungsverzeichnis No access
8. Buchstabencodes der proteinogenen Aminosäuren No access
1. 1. 1.1.1. Lipoxygenasereaktion No access
  2. 1. 1.1.2.1 Klassifizierungskonzepte für Lipoxygenasen (spezifitätsbasiertes Klassifizierungsschema, verwandtschaftsbasiertes Klassifizierungsschema) No access
    2. 1.1.2.2 Protein-chemische Eigenschaften von Lipoxygenasen No access
    3. 1.1.2.3 Enzymatische Eigenschaften von Lipoxygenasen No access
  3. 1. 1.1.3.1 Vorkommen von Lipoxygenasen in den drei Domänen des irdischen Lebens(Bakterien, Archaeen, Eukaryonten) No access
    2. 1.1.3.2 Biologische Rolle von Lipoxygenasen bei Säugetieren No access
2. 1. 1.2.1 Definition und Klassifizierung der Viren No access
  2. 1. 1.2.2.1 Viren als Triebkraft der Genomevolution lebender Systeme No access
    2. 1.2.2.2 Viren als Krankheitserreger für Pro- und Eukaryonten No access
  3. 1. 1.2.3.1 Klassifizierung der Megaviren und deren Aufbau No access
    2. 1.2.3.2 Mimiviren als Subfamilie der Megaviren (Vorkommen und Bedeutung) No access
3. 1.3 Lipoxygenasen bei Viren No access
4. 1.4 Fragestellung No access
1. 1. 2.1.1 Geräte und Hilfsmittel No access
  2. 2.1.2 Chemikalien No access
  3. 2.1.3 Nährmedien, Puffer und sonstige Lösungen No access
  4. 2.1.4 Proteine und Kits No access
  5. 2.1.5 Plasmide und Oligonukleotide No access
  6. 2.1.6 Nukleotid- und Proteinsequenzen No access
  7. 2.1.7 Bakterienstämme No access
  8. 2.1.8 Eukaryontische Zellstämme No access
2. 1. 2.2.1. Datenbankrecherchen No access
  2. 2.2.2. Klonierung der mutmaßlichen Mimivirus-LOX No access
  3. 2.2.3. Transformation von E. coli-Zellen mit dem rekombinanten Expressionsplasmid und Plasmidamplifizierung No access
  4. 2.2.4. Sequenzierung des Expressionsplasmids No access
  5. 2.2.5. Prokaryontische Expression der mutmaßlichen Mimivirus-LOX in E. coli No access
  6. 2.2.6. Eukaryontische Expression der mutmaßlichen Mimivirus-LOX in HEK293-Zellen No access
  7. 2.2.7. Quantifizierung von pro- und eukaryontischer Expression No access
  8. 1. 2.2.8.1 LOX-Aktivitätsassay unter normoxischen Bedingungen No access
    2. 2.2.8.2. LOX Aktivitätstmessungen unter hyperoxischen Bedingungen No access
    3. 2.2.8.3. HPLC-Analytik No access
  9. 1. 2.2.9.1. Affinitätschromatographie No access
    2. 2.2.9.2. Gelfiltration (Fast liquid Chromatographie, FPLC) No access
  10. 1. 2.2.10.1. Bestimmung des Eisengehaltes No access
    2. 2.2.10.2. Massenspektroskopie der tryptischen Spaltpeptide No access
  11. 2.2.11. Sequenzalignments No access
1. 1. 1. 3.1.1.1. Lipoxygenase-ähnliche Sequenzen (Verbalsuche) No access
    2. 3.1.1.2. Filterkriterien zur Reduktion falsch positiver Suchergebnisse (Molekulargewicht, Eisencluster) No access
    3. 3.1.1.3. Aminosäuresequenzalignments der potentiellen Mimivirus-LOX mit humanen ALOX-Isoformen No access
2. 1. 3.2.1. Synthese und Amplifizierung der Mimivirus-LOX-cDNA No access
  2. 3.2.2. Konstruktion, Klonierung und Analyse der rekombinanten prokaryontischenExpressionsplasmide No access
  3. 1. 3.2.3.1. Expression des rekombinanten Proteins mit Hilfe des pQE9-Vektors No access
    2. 3.2.3.2. Expression des rekombinanten Proteins mit Hilfe des pET28-Vektors No access
    3. 3.2.3.3. Protein-chemische Charakterisierung der gereinigten rekombinanten potentiellen Mimivirus-LOX No access
    4. 3.2.3.4. Enzymatische Charakterisierung des gereinigten rekombinanten Proteins(HPLC basierter Aktivitätsassay) No access
3. 1. 3.3.1. Konstruktion und Klonierung des eukaryontischen Expressionsplasmids No access
  2. 1. 3.3.2.1. Testung der Expression des rekombinanten Proteins durch Immunoblotting No access
    2. 3.3.2.2. Testung der rekombinanten Expression mittels Aktivitätsassay No access
4. 1. 3.4.1. Elektrophoretische Trennung der rekombinant exprimierten potentiellen Mimivirus-LOX vom ko-gereinigten bakteriellen Protein No access
1. 4.1. Vorkommen und biologische Rolle von Lipoxygenasen No access
2. 1. 4.2.1. LOX-ähnliche Sequenzen bei Viren No access
  2. 4.2.2. Humanpathogene Viren besitzen keine LOX Gene No access
3. 1. 4.3.1. Die in E. coli exprimierte potentielle Mimivirus-LOX bildet einen hochmolekularenKomplex mit einem unbekannten E. coli-Protein No access
  2. 4.3.2. Das bifunktionale Polymyxin Resistance Protein ArnA bildet mit der potentiellen Mimivirus-LOX einen nicht-kovalenten Komplex No access
  3. 4.3.3. Biologische Bedeutung des bifunktionale Polymyxin Resistance ProteinArnA No access
  4. 4.3.4. Die potentielle Mimivirus-LOX zeigt keine Fettsäureoxygenaseaktivität unternormoxischen Bedingungen No access
  5. 4.3.5. Die potentielle Mimivirus-LOX zeigt keine Fettsäureoxygenaseaktivität unter hyperoxischen Bedingungen No access
  6. 4.3.6. Die potentielle Mimivirus-LOX konnte in HEK-Zellen nicht exprimiert werden No access
4. 1. 4.4.1. Biologische Rolle des horizontalen Gentransfers No access
  2. 4.4.2. Mechanismen des horizontalen Gentransfers No access
  3. 4.4.3. Mögliche Verbreitung von LOX-Genen durch horizontalen Gentransfer No access
5. Ausblick No access Pages 124 - 125
6. Literaturverzeichnis No access Pages 126 - 146
Publikationen No access Pages 147 - 147
Danksagung No access Pages 148 - 148

Rekombinante Expression und proteinchemische Charakterisierung einer potentiellen viralen (Mimivirus Acanthamoeba polyphaga) Lipoxygenase

Keywords

Search publication

Bibliographic data

Table of contents